Вы здесь

Лабораторная диагностика малярии

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА МАЛЯРИИ

В организме человека могут паразитировать и вызывать заболевание четыре вида возбудителей малярии: Plasmodium vivax — возбудитель трехдневной малярии, Plasmodium malarjae — четырехдневной малярии, Plasmodium falciparum — тропической малярии и Plasmodium ovale — возбудитель, подобный возбудителю трехдневной малярии.

Комары рода Anopheles maculipennis (самки) переносят возбудители малярии от больного человека здоровому. При укусе со слюной комара в подкожную клетчатку человека попадают спорозоиты, которые в дальнейшем развиваются в клетках мезенхимного происхождения — тканевая шизогония. После этого сформировавшиеся молодые тканевые мерозоиты (криптозонты) проникают в эритроциты и там проходят бесполый цикл развития — эритроцитарная шизогония. При трехдневной малярии, наряду с внедрением тканевых мерозоитов в эритроциты, часть их снова попадает в клетки ретикулоэндотелиальной системы, где повторяет беспигментный (тканевой) цикл развития (параэритроцитарные формы).

Для тропической малярии параэритроцитарные формы не характерны.

Тканевые мерозоиты проникают в эритроциты человека, где происходит их дальнейшее развитие — шизогония. Юные шизонты в эритроците представляют собой овальные тельца, состоящие из ядра, протоплазмы и пищеварительной вакуоли. При окраске препарата по методу Романовского — Гимзы паразит напоминает перстень, так как ядро окрашивается в красный цвет, а протоплазма в синий. Такую форму паразит имеет в течение 6—8 ч. Затем протоплазменная часть увеличивается и появляется железосодержащий пигмент меланин или гемосидерин, который образуется при переработке гемоглобина плазмодием. Возбудитель растет, взрослый шизонт занимает почти весь эритроцит. Плазмодий округляется, движение его прекращается, начинается деление ядра — стадия морулы. Пигмент концентрируется в центре клетки. При делении ядра и протоплазмы образуется 16—20—24 мерозоитов. В последующем оболочки эритроцитов и морулы разрушаются и мерозоиты попадают в плазму крови. Сохранившиеся в плазме мерозоиты внедряются в новые эритроциты, повторяя бесполый цикл развития. Через 3—5 циклов шизогонии из некоторых мерозоитов образуются половые клетки — гаметоциты (мужские и женские) (рис. 28).

рис. 28 Эритроцитарный цикл развития плазмодиев трехдневной, четырехдневной и тропической малярии

Дальнейший половой цикл развития гаметоциты проходят при попадании в организм самки комара анофелес.



Плечо

В желудке комара происходит слияние микрогамет (мужских половых клеток) и макрогамет (женских), в результате образуется зигота, которая превращается в подвижную клетку — оокинету. Оокинета проникает под серозную оболочку желудка комара и там превращается в ооцисту, а затем цисту, заполненную спорозоитами. Циста лопается и спорозоиты с лимфой распространяются по всему телу комара, попадая также в его слюнные железы. Только теперь комар может заражать человека при укусе. Спорогония протекает при температуре внешней среды не ниже +16°С, а для возбудителя тропической малярии — не ниже +18°С.

Для лабораторного подтверждения диагноза из крови больного готовят мазок и толстую каплю, в которой вероятность обнаружения возбудителя большая (одно поле зрения толстой капли соответствует 50 полям тонкого мазка). Для идентификации возбудителя исследуют и мазок.

Толстую каплю готовят следующим образом. На предметное стекло наносят 2—3 капли крови и размазывают ее до диаметра десятикопеечной монеты. Кровь подсушивают на воздухе, затем к ней добавляют дистиллированную воду для удаления из эритроцитов гемоглобина, вновь подсушивают, окрашивают по Романовскому — Гимзе на протяжении 45 мин, после чего краску смывают, препараты подсушивают и микроскопируют.

Чтобы приготовить мазок, на край предметного стекла наносят небольшую каплю крови. Вторым стеклом со шлифованным краем равномерно размазывают кровь так, чтобы получился тонкий препарат (мазок). Мазок высушивают, фиксируют смесью Никифорова, а затем окрашивают краской Романовского — Гимзы в течение 30 мин, смывают водой, подсушивают и микроскопируют.

Микроскопируя препараты, распознают вид плазмодия. Эритроциты, в которых находятся возбудители трехдневной малярии, увеличены в размерах (в 1,5 раза), бледнее окрашены, по сравнению с эритроцитами, свободными от плазмодиев. В пораженных плазмодиями эритроцитах появляется нежная, равномерно красного цвета зернистость, распределяющаяся по всему эритроциту (шуфнеровская зернистость). Шизонт амебовидной формы, стадия морулы имеет вид тутовой ягоды. Эритроциты, которые содержат возбудителей четырехдневной малярии, в размерах не увеличиваются. В первые 10 ч паразит имеет форму кольца, меньших размеров, чем возбудитель трехдневной малярии, затем шизонт принимает форму ленты, расположенной поперек эритроцита. В этой стадии паразит занимает 1/2—1/3 объема эритроцита, ядро лежит на краю ленты. Стадия морулы имеет форму розетки и включает 6—8—10 мерозоитов. Пигмент золотисто-желтого цвета.

Форма и размеры эритроцитов при тропической малярии не изменяются. В периферической, крови взрослые шизонты и формы их деления не встречаются, так как эти стадии происходят в кровеносных капиллярах внутренних органов, мозга пристеночно. Это самый мелкий паразит из всех возбудителей малярии. В стадии деления он не занимает диаметра эритроцита. В периферической крови можно обнаружить юные шизонты в виде колец, по 2—4 в одном эритроците, и половые клетки. В эритроцитах с паразитами появляется грубая зернистость в виде пятен неправильной формы пурпурно-красного цвета (мауреровская пятнистость). Диагноз ставится на основании обнаружения в периферической крови юных шизонтов (по 2—3 в одном эритроците) или взрослых гаметоцитов, которые имеют вид полулуния либо сигары. Ядро в этих клетках расположено посередине и окружено зернами пигмента черно-коричневого цвета.